VẮC XIN BCG

Vaccinum BCG cryodessicatum

 

Định nghĩa

Vắc xin BCG đông khô là chế phẩm vi khuẩn Calmette và Guerin sống dùng để tiêm trong da phòng bệnh lao. Vắc xin được sản xuất ở dạng đông khô và hoàn nguyên ngay trước khi dùng với dung dịch hồi chỉnh thích hợp.

 

Sản xuất

Vắc xin BCG được sản xuất từ hệ thống chủng giống. Chủng được lựa chọn và bảo quản ổn định. Phương pháp sản xuất phải cho sản lượng vắc xin BCG ổn định và có khả năng gây mẫn cảm đối với tuberculin cho người và bảo vệ được động vật thí nghiệm chống lại bệnh lao. Chủng sản xuất phải an toàn đối với người và động vật thí nghiệm. Vắc xin BCG được sản xuất tại Việt Nam từ chủng BCG 1173P2-Pasteur Paris.

Chủng được nuôi trong môi trường Sauton - khoai tây, sau đó cấy chuyển sang môi trường Sauton lỏng. Sau khi gặt vi khuẩn, BCG được chế thành hỗn dịch vắc xin thuần nhất và đông khô.

Vắc xin được điều chế từ canh cấy phải được tách biệt khỏi chủng gốc ban đầu bằng những lần cấy chuyển và không được cấy chuyển quá 8 lần.

Chủng sản xuất

Chủng gốc phải được thiết lập và duy trì để đảm bảo tính ổn định, có khả năng gây mẫn cảm đối với tuberculin cho người và chuột lang, không gây bệnh cho người và động vật thí nghiệm.

Vắc xin BCG phải được bảo quản tránh ánh sáng mặt trời: Toàn bộ quy trình sản xuất phải được thiết kế sao cho từ nuôi cấy sản xuất vắc xin đến kiểm định, bảo quản đều không tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời, tia cực tím.

 

Kiểm định vắc xin bán thành phẩm cuối cùng

Vô khuẩn: Phụ lục 15.7.

Phát hiện Mycobacteria gây bệnh:

Chỉ được dùng những mẫu vắc xin BCG bán thành phẩm cuối cùng cho thử nghiệm này khi bảo quản ở 4^OC không quá 72 giờ sau khi gặt.

Thử nghiệm này thường được tiến hành trên mẫu bán thành phẩm và mẫu vắc xin BCG thành phẩm nếu cần thiết. Phụ lục 15.9.

Đậm độ vi khuẩn BCG

Có thể đo trực tiếp đậm độ vi khuẩn BCG trong huyền dịch vắc xin BCG bán thành phẩm cuối cùng  bằng cách cân trọng lượng khô hoặc gián tiếp bằng cách đo mật độ quang học của huyền dịch vi khuẩn đã được hiệu chuẩn tương ứng với trọng lượng khô.

Độ sống: Phụ lục 15.1.

 

Kiểm định vắc xin thành phẩm

Hình dạng bên ngoài và tốc độ tạo huyền dịch: Bột trắng, khô, bong, không teo; nhanh chóng tạo thành huyền dịch đồng nhất sau 1 phút hoàn nguyên với nước muối sinh lý.

Mật độ quang học (Đo bằng quang phổ kế ở bước sóng 490 nm, lọc màu xanh lá cây): Chỉ số mật độ quang học phải đạt là  £ 0,5.

Độ phân tán: Phụ lục 15.3.

Vắc xin BCG đông khô được hoàn nguyên trong nước muối sinh lý để có đậm độ 1 mg/ml. Đo mật độ quang học của hỗn dịch vắc xin ở 2 bước sóng: 434 nm và 630 nm và tính kết quả theo công thức.

Tiêu chuẩn chấp thuận: Độ phân tán cho phép là ³ 0,9.

Độ chân không : ³ 95% tổng số ống phải đạt độ chân không. Phụ lục 15.2.

Độ ẩm tồn dư:  £ 3% (phương pháp Karl Fischer). Phụ lục 15.35.

Vô khuẩn: Phụ lục 15.7.

Nhận dạng:

Nhận dạng BCG qua kính hiển vi để khẳng định tính kháng axít của vi khuẩn và quan sát hình thái khuẩn lạc trên môi trường đặc.

Thử nghiệm an toàn chung:

Thử nghiệm an toàn chung cho vắc xin BCG chỉ tiến hành trên chuột nhắt trắng: 5 chuột nhắt trắng 17-22 g/con. Tiêm dưới da 1 mg vắc xin BCG/1ml/chuột. Theo dõi và cân trọng lượng từng chuột trong 7 ngày. Nếu trong thời gian 7 ngày theo dõi có bất kỳ chuột nào bị giảm cân hoặc chết phải nhắc lại thí nghiệm lần 2 với số lượng chuột và mẫu gấp đôi.

Tiêu chuẩn chấp thuận: Sau 7 ngày theo dõi, cả 5 chuột đều khoẻ mạnh, lên cân, không có biểu hiện bệnh lý.

Thử nghiệm an toàn đặc hiệu (Phát hiện mycobacteria gây bệnh):

Thử nghiệm này thường được tiến hành trên mẫu bán thành phẩm và mẫu vắc xin BCG thành phẩm nếu cần thiết. Phụ lục 15.9.

Kiểm tra phản ứng da:

Tiêm trong da cho ít nhất 4 chuột lang cùng giới (nếu là chuột cái thì không có thai), có phản ứng âm tính với tuberculin, trọng lượng 250-400g/con. Tiêm cho mỗi chuột 0,1 ml vắc xin của từng đậm độ pha loãng 1/1; 1/10; 1/100 (của vắc xin thử và vắc xin mẫu chuẩn). Theo dõi thương tổn tại chỗ tiêm hàng tuần, trong 4 tuần. Sau 4 tuần, kiểm tra phản ứng tuberculin bằng cách tiêm trong da 5 TU/0,1ml/chuột. Đọc kết quả phản ứng sau 24 giờ.

Tiêu chuẩn chấp thuận: Phản ứng da đối với vắc xin thử và vắc xin mẫu chuẩn phải không có sự khác biệt đáng kể.

Kiểm tra  độ sống:

Xác định độ sống trong vắc xin đã hoàn nguyên bằng cách đếm số lượng khuẩn lạc trên môi trường Lowenstein-Jensen. Số lượng đơn vị sống phải nằm trong khoảng 1.10⁶ - 6.10⁶ đvs/mg BCG. Phụ lục 15.1.

Tính ổn định nhiệt:

Số đơn vị sống của vắc xin BCG sau khi ủ ở 37^OC/28 ngày phải đạt ít nhất là 20% so với ủ ở 4^OC/28 ngày. Phụ lục  15.1.

 

Bảo quản - hạn dùng:

Vắc xin BCG đông khô cần được bảo quản trong điều kiện nhiệt độ 2- 8^OC và tránh ánh sáng mặt trời, hạn dùng ít nhất 24 tháng. Sau khi hoàn nguyên vắc xin  phải được bảo quản tránh ánh sáng mặt trời ở điều kiện 2-8^OC và chỉ được sử dụng trong khoảng thời gian tối đa là 4 giờ.

 

Nhãn, hộp:

Những thông tin  đối với nhãn, hộp, tờ hướng dẫn sử dụng phải đáp ứng những yêu cầu quy định trong Thông tư số 04/2008/TT-BYT, ngày 12/5/2008 của Bộ Y tế về Hướng dẫn ghi nhãn thuốc.